用nested-PCR方法快速检测鲑鱼肾杆菌

摘要

描述了用嵌套式聚合酶链式反应(nested-PCR)快速检测鲑鱼细菌性肾病病原鲑鱼肾杆菌的方法.以BKDR和BKDF为引物,扩增鲑肾杆菌编码57 kDa主要可溶性蛋白基因中501 bp的DNA片段,再用引物BKDR2和BKDF2扩增其中长度为314 bp的DNA片段.用其它15种常见鱼类致病菌验证这两组引物的特异性,结果没有非特异性的DNA片段被扩增出来.用酚抽提法和煮沸加冻融的方法获得的细菌裂解产物,PCR检测的灵敏度均可达到1.8×103CFU@mL-1,用Nested-PCR进一步扩增PCR扩增的产物,检测灵敏度可再提高100倍.检测鲑鱼肾杆菌菌悬液与鲟卵的混合物,结果表明,该方法能准确、可靠、快速地检测鲑肾杆菌.