黄颡鱼脑P-450芳香化酶基因的克隆和组织表达

摘要

P-450芳香化酶(P450arom)是催化雄激素生物合成雌激素的关键酶.本文采用RT-PCR和RACE法,首次分离和克隆了黄颡鱼脑P450 芳香化酶基因HP450aromB, 并使用荧光实时定量RT-PCR对其组织表达进行了研究.结果表明HP450aromB cDNA全长2080 bp(不包括poly(A)), 5′端非翻译区有25 bp,3′端555 bp(不包含poly(A)),阅读框(open reading frame, ORF)1500 bp,编码 500个氨基酸,推测的蛋白质分子量为56 kDa.同源性分析显示,HP450aromB的氨基酸序列与其它鱼脑P450arom具有70%以上的同源性,与其它鱼卵巢P450arom为60%左右同源,与人胚盘和鸡卵巢P450arom 则为50%左右同源;但芳香化酶高保守区包括I-螺旋区,芳香化酶特异保守区II及血红素结合区III和其它鱼芳香化酶相比同源性分别为83%～96%,78%～86%和85%～100%.系统发育分析表明HP450aromB与鱼类脑P450arom属于同一分支的,并且也显示了黄颡鱼和鲶鱼分类地位最近,这和传统的分类一致.实时定量RT-PCR研究显示,HP450arom B在前脑,下丘脑,垂体、卵巢、精巢均有表达,在肝脏没表达,表达量脑部高于性腺,但雌雄鱼脑部HP450arom B的表达总量没显著差异.