酪氨酸激酶抑制剂STI571与P21^(WAF)基因克隆治疗慢性粒细胞白血病的实验研究

摘要

本研究探讨酪氨酸激酶抑制剂STI5 71和P2 1WAF基因克隆对慢性粒细胞白血病急变K5 62细胞株的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的治疗作用。RT PCR扩增P2 1WAF基因 ,胶纯化回收后连接到T载体测序 ,序列正确后构建P2 1 pcDNA3 .1载体 ,将P2 1 pcDNA3 .1与空载体分别以脂质体转染入P2 1蛋白表达缺如的K5 62细胞 ,经筛选得到G4 18抗性的K5 62细胞株 ,Westernblot证实转染后有P2 1蛋白表达 ,MTT法检测细胞存活率 ,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果表明 :表达外源性P2 1蛋白的P2 1 pcDNA3 .1 K5 62细胞株生长速度明显慢于对照K5 62细胞株 ,流式细胞仪显示G0 /G1期细胞增多 ,MTT法显示P2 1 pcDNA3 .1 K5 62细胞与STI5 71联合应用后 ,与单用STI5 71作用的K5 62细胞相比 ,凋亡细胞比例轻度减少 ,细胞存活率下降较慢。结论 :表达外源P2 1蛋白能抑制K5 62细胞增殖 ,同时对STI5 71的促凋亡作用有轻度抑制 ,并降低K5 62细胞对STI5 71的敏感性。