实时定量PCR检测46例初诊急性早幼粒细胞白血病患者PML/RARαmRNA的分子表达

摘要

本研究探讨实时定量PCR(Q-PCR)检测PML/RARα mRNA的方法学,并对46例初诊急性早幼粒细胞白血病(APL)患者骨髓标本进行检测.构建PML/RARα的bcr1型和bcr3型转录本以及内参照abl基因转录本的阳性标准品质粒;利用ABI Prism 7500型Q-PCR仪对46例初诊APL患者和40例非APL患者骨髓标本进行检测,PML/RARα mRNA定量结果以校正比值(NQ)表示,NQ=PML/RARα mRNA拷贝数/ABLmRNA拷贝数;应用四色流式细胞术检测免疫表型.结果显示,Q-PCR结果的日间差和日内差平均变异系数(CV)分别为1.58%和0.88%.可重复敏感度为可以检测5 copies/100 ng RNA.40例非APL患者PML/RARα mRNA均为阴性.46例初诊APL患者PML/RARαmRNA表达量NQ中位值为0.450(0.084-1.082).比较32例bcr1型和14例bcr3型两组患者的特征表明,PML/RARαmRNA NQ中位值分别为0.454(0.084-1.082)和0.386(0.151-0.848)(P＞0.05).形态学诊断M3v的患者比例分别为9.40%和48.96%(P＜0.05);初诊时WBC中位数分别为2.15(0.2-59.6)和9.35(0.91-122.8)(P＜0.05),而在性别、年龄、初诊时血红蛋白和血小板计数、骨髓中APL细胞比例、DIC指标等方面无差异.流式细胞仪术检测时,CD45/SSC射门情况下,APL细胞群分布可以分为两类:高侧向角(L-SSC,粗颗粒)和非高侧向角(NL-SSC,细颗粒)两类.bcr1型患者中85.70%表现为L-SSC,而bcr3型患者中64.29%表现为NL-SSC.结论:建立的Q-PCR方法稳定可靠,敏感度高;bcr1型和bcr3型APL患者的PML/RARαmRNA表达量无差异,bcr3型APL患者中形态学M3v比例和WBC数比bcr1型患者高;PML/RARα不同转录本类型和免疫表型以及细胞形态学之间有一定的相关性.