IFN-γ在小鼠造血调节中的作用

摘要

本研究旨在探讨IFN-γ在小鼠骨髓造血调节中的作用及其作用机制.通过RT-PCR方法扩增小鼠IFN-γ(mIFN-γ)片段,构建mIFN-γ慢病毒表达载体pCDH1-mIFN-γ-EF1-copGFP(pCDH-mIFN-γ-GFP).将pCDH-mIFN-γ-GFP和pCDH1-EF1-copGFP (pCDH-GFP)分别与辅助质粒pPACK-A、pPACK-B、pPACK-C组合,通过磷酸钙沉淀法转染293T细胞,制备慢病毒.通过慢病毒将mIFN-γ和GFP转导至C57BL/6J雄性小鼠的骨髓单个核细胞,接种于M3434甲基纤维素完全培养基进行集落形成试验,同时将其通过尾静脉注射给致死剂量照射的受体C57BL/6J小鼠体内,定期进行血常规检查.结果显示,成功构建pCDH-mIFN-γ-GFP慢病毒载体;转导mIFN-γ的293T细胞分泌mIFN-γ蛋白;转导mIFN-γ的小鼠骨髓单个核细胞集落生成数量较对照组显著减少,集落形成能力下降;mIFN-γ组的骨髓移植小鼠血象恢复较GFP对照组延迟,移植后8周流式细胞术检测外周血仍可见GFP阳性细胞.结论:mIFN-γ降低了造血干/祖细胞的增殖能力,延缓骨髓移植小鼠的造血恢复时间.