重组诱导型一氧化氮合酶在NG108-15细胞中稳定表达及其生物学特性

摘要

本文用重组iNOS基因真核表达载体转染NG108-15神经母细胞瘤和神经胶质瘤杂交细胞株,获得G418抗性克隆。在稳定表达iNOS基因2~#克隆中,胞浆相酶活性增加,伴有NO_2^-含量和胞内cGMP水平增高,提示iNOS基因表达参与NO-cGMP信号转导通路,且可被L-NNA和MB所阻断。蛋白表达产物的亚细胞定位分析显示功能性iNOS主要位于细胞胞浆中。对转染细胞做外源基因整合、转录和翻译水平鉴定,证实均有较高水平iNOS mR-NA转录和特异性蛋白表达,成功地建立了稳定表达iNOS基因的工程细胞。