幼鼠脓毒症模型中Rankl调控胸腺自然调节性T细胞免疫平衡的作用机制研究

摘要

目的探讨核因子κB受体激活因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand,Rankl)对脓毒症幼鼠胸腺自然调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的免疫调控机制。方法采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)腹腔注射构建SD雄性幼鼠脓毒症模型。48只幼鼠按LPS浓度梯度分为4组,分别注射生理盐水(对照组)和5、8、10 mg/kg LPS,每组12只。24只幼鼠按给药分组,随机分为对照组、脓毒症组、野黄芩苷(Rankl抑制剂)组、白桦脂酸(NF-κB激动剂)组共4组,每组6只。取胸腺组织行免疫组化染色,计算Rankl、自身免疫调节因子(autoimmunity regulator,Aire)、叉头翼状螺旋转录因子(forkhead box P3,Foxp3)阳性细胞的平均光密度。胸腺组织匀浆免疫印迹法测定Rankl、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)p65、Aire、Foxp3的蛋白表达水平。统计学分析采用单因素方差分析和t检验。结果不同浓度梯度模型中,对照组与腹腔注射LPS 5、8、10 mg/kg组,48 h时胸腺组织阳性细胞平均光密度比较[Rankl:(0.209±0.021)%、(0.256±0.008)%、(0.302±0.015)%、(0.361±0.023)%;Aire:(0.279±0.017)%、(0.350±0.021)%、(0.402±0.013)%、(0.459±0.024)%;Foxp3:(0.207±0.014)%、(0.237±0.010)%、(0.277±0.011)%、(0.310±0.016)%],蛋白表达水平比较(Rankl:0.577±0.079、0.740±0.079、0.935±0.043、1.240±0.109;NF-κBp 65:0.150±0.064、0.306±0.055、0.534±0.077、0.949±0.077;Aire:0.324±0.039、0.571±0.062、0.737±0.091、1.019±0.120;Foxp3:0.226±0.098、0.475±0.035、0.824±0.070、1.148±0.087),LPS造模组均高于对照组(P值均<0.05);且随LPS剂量增加而增加,10 mg/kg组增加最明显。不同给药模型中,脓毒症组、野黄芩苷组、白桦脂酸组的胸腺组织阳性细胞平均光密度比较[Rankl:(0.343±0.022)%、(0.262±0.014)%、(0.299±0.020)%;Foxp3:(0.380±0.016)%、(0.340±0.013)%、(0.426±0.012)%;Aire:(0.671±0.079)%、(0.437±0.109)%、(0.893±0.034)%],蛋白表达水平比较(Rankl:0.945±0.059、0.626±0.072、0.801±0.052;NF-κB p65:0.671±0.079、0.633±0.191、1.229±0.106;Aire:0.815±0.144、0.437±0.109、1.219±0.114;Foxp3:0.773±0.093、0.453±0.143、1.256±0.086),野黄芩苷组均低于脓毒症组,白桦脂酸组除了Rankl,其余指标均高于脓毒症组(P值均<0.05)。结论在幼鼠脓毒症模型中,Rankl通过激活NF-κB/Aire/Foxp3信号通路使胸腺Treg大量增殖,发生免疫失调。Rankl抑制剂野黄芩苷可调节此失衡状态,对脓毒症幼鼠产生保护效应。