牙鲆补体C3 mRNA杂交保护检测技术

摘要

应用杂交保护检测(Hybridization Protection Assay,HPA)技术研究建立检测补体C3 mRNA方法。选择牙鲆Paralichthys olivaceus补体C3 mRNA(Genebank accession no.AB021653)设计为长度24个碱基寡核苷酸片断的AE标记寡核苷酸探针(位置=2327-2350,5 CGG GAG TTG TTTG#TG GGTTGA CAC 3),寡核苷酸探针合成过程中在#位加入烷基胺连接臂连接AE。人工合成与探针互补的标准靶寡核苷酸(5 GTGTCA ACC CAC AAA CAA CTC CCG 3)。AE标记寡核苷酸探针活性为6×104RLU/pmol。杂交时间为50 min时,在1×10-3~4×102pmol/mL探针浓度范围内,AE标记探针浓度与发光值之间具有良好的线性关系(R2=0.9996);标准靶寡核苷酸标准曲线说明,在标准靶寡核苷酸浓度为0~320 pmol/mL(含量为0~3200 fmol)时,具有良好的线性关系(R2=0.9922)。