日本血吸虫童虫cDNA文库免疫学筛选及H1基因的克隆

摘要

目的获取可能编码新的血吸虫诊断和候选疫苗分子的cDNA克隆. 方法利用血吸虫病患者的血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,获得一批阳性克隆,并对H1克隆插入片段的核苷酸进行序列测定.根据结果,一方面进行同源性分析;另一方面设计合成引物,应用PCR法进行扩增,并将其克隆入pGEM-T载体. 结果用抗血清初筛约7.2×103个重组的噬菌体,得到12个持续阳性反应克隆,其中H1克隆的插入片段长度为1 186 bp,具有一个591 bp的完整开放阅读框,与现有的基因无任何同源性.利用PCR法成功地扩增了该基因,并克隆入载体pGEM-T. 结论从cDNA文库中筛选的对血吸虫感染可能具有保护作用的分子克隆是可行的,为进一步研究提供了基础.