原代人眼Tenon's囊成纤维细胞的生物学特性及体外培养方案优化

摘要

目的 优化原代人Tenon's囊成纤维细胞(HTFs)体外分离、培养的实验方法,并对体外培养的HTFs的生长特性进行观察.方法 采用优化的组织块贴壁法培养原代HTFs;倒置显微镜观察HTFs的基本形态特征;免疫荧光染色Vimentin及Cytokeratin对所培养的原代细胞进行鉴定;采用噻唑蓝比色试验检测细胞增殖活性及生长曲线;流式细胞术检测细胞周期及增值指数.结果 组织块贴壁后4～7 d可以见长梭形细胞长出,2～3周后可传代.细胞生长曲线近似"S"形,MTT法显示在第3～5 d细胞增殖能力显著.免疫荧光染色Vimentin阳性率达98％,Cytokeratin阴性,符合HTFs特性且无上皮细胞污染.第3～4代HTFs中(63.48 ±10.22)％处于GO/G1期,(10.80 ±5.07)％处于G2/M期,(24.34 ±8.07)％处于S期,HTFs的增殖指数为35.6％,细胞增殖良好.结论 建立了一种简单、经济、有效的获取原代人Tenon's囊成纤维细胞的方法,为研究青光眼滤过泡瘢痕化提供了可靠的靶细胞模型.