菊米提取物调控lncRNA RMRP基因对高糖诱导的人肾小管上皮细胞中炎性和纤维化成分的影响

摘要

目的探讨菊米提取物对高糖(high glucose,HG)诱导的人肾小管上皮细胞中炎性和纤维化成分表达的影响与分子机制。方法将肾小管上皮细胞HK-2分为NC(空白对照)组、OSM(渗透压对照)组、HG(高糖处理)组、HG+低、中、高剂量组、si-NC+HG组、si-LncRNA RMRP+HG组、pcDNA+HG+高剂量组、pcDNA-LncRNA RMRP+HG+高剂量组。其中,NC组以5.5 mmol/L葡萄糖处理,OSM组以5.5 mmol/L葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇处理,HG组以30 mmol/L葡萄糖处理,HG+低、中、高剂量组以30 mmol/L葡萄糖+0.01、0.02、0.04 mg/mL菊米提取物处理,si-NC+HG组、siLncRNA RMRP+HG组、pcDNA+HG+高剂量组和pcDNA-LncRNA RMRP+HG+高剂量组转染si-NC、si-LncRNA RMRP、pcDNA、pcDNA-LncRNA RMRP后以30 mmol/L葡萄糖或30 mmol/L葡萄糖+0.04 mg/mL菊米提取物处理。应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法测定细胞活性,蛋白质免疫印迹法检测纤维化因子α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维连接蛋白(fibronectin,Fn)、Ⅰ型胶原蛋白α1链(collagen type I alpha 1,COL1a1)表达,ELISA检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平,定量逆转录PCR(quantitative reverse transcription PCR,RT-q)检测LncRNA RMRP表达。结果0.01、0.02、0.04 mg/mL浓度的菊米提取物使高糖处理的肾小管上皮细胞HK-2的活性逐渐增加,α-SMA、Fn、COL1a1蛋白表达、TNF-α、IL-6水平和LncRNA RMRP表达逐渐减少(P<0.05)。si-LncRNA RMRP抑制高糖处理的肾小管上皮细胞HK-2中α-SMA、Fn、COL1a1蛋白表达、TNF-α和IL-6水平(P<0.05)。LncRNA RMRP可以减弱菊米提取物对高糖处理的肾小管上皮细胞HK-2炎性和纤维化因子表达的抑制作用。结论菊米提取物通过下调LncRNA RMRP表达,抑制高糖诱导的人肾小管上皮细胞炎性和纤维化成分的表达。