镧示踪法透射电镜显示肾脏细胞糖萼的方法学研究

摘要

目的 不同方案灌注小鼠后电镜观察肾脏各种细胞糖萼的显示情况,探讨镧示踪法显示肾脏细胞糖萼的最佳方法.方法 根据灌注方案的不同,将C57/BL6小鼠分为3组:①生理盐水组:小鼠放血后,用生理盐水5 ml自主动脉灌注,取肾脏后用2％硝酸镧一戊二醛固定液固定;②硝酸镧固定液组:用2％硝酸镧一戊二醛固定液5 ml相同方法灌注,取肾脏后固定方法同前;③硝酸镧溶液组:用2％硝酸镧溶液和2％硝酸镧一戊二醛固定液5 ml先后进行灌注,取肾脏后固定方法同前.各组均应用透射电镜观察肾脏的肾间质血管内皮细胞、肾小球内皮细胞、足细胞和肾间质细胞连接的糖萼的显示情况,计算各组不同肾脏细胞糖萼的显示率,并进行比较.结果 镧示踪法透射电镜显示的小鼠肾脏细胞的正常糖萼表现为附着于细胞表面的一层电子致密物层.生理盐水组的肾间质血管内皮细胞、肾小球内皮细胞糖萼层的显示率均为0％;足细胞糖萼的显示率为20％;肾间质细胞连接的糖萼显示率(92％)较高.硝酸镧固定液组的肾间质血管内皮细胞和肾小球内皮细胞显示率较低(分别为16％和12％);足细胞糖萼和细胞连接的糖萼层显示率相对较高(分别为84％和96％).硝酸镧溶液组的肾脏各种细胞糖萼均能清晰显示,肾间质血管内皮细胞、肾小球内皮细胞、足细胞和细胞连接糖萼的显示率分别为100％、96％、92％和100％.与生理盐水组和硝酸镧固定液组比较,硝酸镧溶液组的肾间质血管内皮细胞、肾小球内皮细胞糖萼的显示率均显著增高(P＜0.01).硝酸镧固定液组和硝酸镧溶液组的足细胞糖萼的显示率均较生理盐水组显著增高(P＜0.01).各组的肾间质细胞连接糖萼的显示率无统计学差异(P＞0.05).结论 2％硝酸镧溶液和2％硝酸镧一戊二醛固定液先后灌注小鼠,取肾脏用相同固定液固定后行透射电镜检查,能清晰显示肾脏各种细胞糖萼层,尤其是肾脏血管内皮细胞糖萼层,这为肾脏糖萼的相关研究提供一种可靠的实验方法.