骨髓单个核细胞构建细胞化生物组织工程血管支架的研究

摘要

cqvip:目的研究鼠骨髓来源平滑肌祖细胞(SPCs)和内皮祖细胞(EPCs)在细胞外基质支架上的生长特性,为生物组织工程血管寻找更新的种子细胞和支架。方法将鼠骨髓来源单个核细胞(BMCs)分别用不同的培养基进行诱导分化,于培养10 d后用免疫荧光双标技术(CD34/VWF)鉴定EPCs,用-αSMA/CD14鉴定SPC。将纤维蛋白原、层粘连蛋白和纤粘连蛋白按一定比例混合后,在新鲜大鼠血浆促凝作用下,构建毯状细胞外基质(ECM)支架,在支架表面种植诱导培养骨髓来源的第2代SPCs和EPCs。用扫描电镜和透射电镜观察和分析的支架表面结构以及细胞在支架上生长情况。结果单个核细胞经EBM-2培养基诱导,培养至10 d双荧光染色结果表明,培养贴壁细胞中约90%的EPCs呈VWF/CD34双阳性;经bFGF的M-199培养基诱导阳性率逐渐增加,培养至10 d双荧光染色结果表明,培养贴壁细胞中SPCs呈-αSMA/CD14双标阳性100%。将诱导培养的第2代SPCs,种植在支架上,4 d时倒置显微镜示SPCs在支架表面细胞融合呈现典型的"峰"、"谷"样形态,当EPCs被种植10 d时扫描电镜显示在支架表面形成一个完整的较平整的细胞平面。透射电镜发现在多层平滑肌祖细胞表面有单层内皮祖细胞,呈三维立体结构,具有天然血管的内膜和中膜,更接近天然血管的结构。结论BMCs将是组织工程血管最理想的细胞来源,细胞外基质支架能显著促进SPCs和EPCs粘附、增殖和分化,可作为SPCs和EPCs生长的载体,可作为一种新颖的合成人造血管的生物组织工程支架。