Snail1外源性过表达诱导HepG2细胞上皮间叶样表型转化的实验研究

摘要

cqvip:目的探讨Snail1蛋白诱导肝癌细胞发生上皮间叶表型转化并增强其侵袭转移能力的效应。方法利用重组腺病毒载体pAdEasy-SNAI1高效感染HepG2肝癌细胞株,诱导外源性Snail1蛋白过表达,以空载腺病毒pAdEasy-GFP作为对照。利用RT-PCR、Western blot和细胞免疫组织化学的方法,检测转染后HepG2细胞Snail1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的mRNA转录和蛋白表达水平。随机运动实验及侵袭实验检测HepG2细胞转染目的基因后运动侵袭能力的改变。结果①pAdEasy-SNAI1高效感染HepG2细胞,与对照组相比SNAI1mRNA和Snail1蛋白表达均显著增强(分别为1.591±0.090、0.414±0.031,0.995±0.009、0.423±0.002,P<0.01),Snai1蛋白在胞浆和胞核着色明显强化。②实验组HepG2细胞,在mRNA和蛋白水平E-cadherin表达均显著受到抑制(分别为0.528±0.037、1.668±0.065,0.284±0.003、1.067±0.011,P<0.01),N-cadhrein、Vimentin表达则明显上调(N-cadhrein:0.945±0.029、0.600±0.015,0.655±0.007、0.226±0.007,P<0.01;Vimentin:1.630±0.123、0.291±0.024,0.692±0.009、0.219±0.005,P<0.01);③实验组随机运动实验中各观察时相点细胞空白区均小于对照组;侵袭实验中,实验组穿膜细胞数多于对照组(59.4±7.48、23.9±4.15,P<0.01)。结论外源性Snail1蛋白过表达能诱导HepG2细胞出现EMT样变化,细胞运动、侵袭能力增强。