丙型肝炎病毒基因片段体外转录和真核表达载体的构建与鉴定

摘要

目的探讨基因免疫和基因治疗用于丙型肝炎病毒(HCV)疫苗及抗HCV感染的可行性,构建含HCV基因片段的体外转录和真核表达载体.方法从HCV慢性感染患者血清中提取总RNA后, 采用逆转录PCR 扩增出含有5'NCR和编码核心蛋白C区上游基因片段的HCV-cDNA,经Hind Ⅲ 和EcoRⅠ双酶切后,定向克隆入体外转录载体pGEM3ZF(-)和真核表达载体pBBS212中,构建成pGEM3ZF-HCV和pBBS212-HCV重组表达质粒,并经双酶切鉴定.结果用Hind Ⅲ 和EcoRⅠ双酶切鉴定证实,克隆的HCV基因片段正确插入载体pGEM3ZF(-)和pBBS212中.结论成功构建含5'NCR和部分核心C区基因的体外转录及真核表达载体,可为进一步研究HCV基因疫苗以及核酶基因治疗HCV奠定基础.