大鼠骨髓间质干细胞向肝细胞横向分化过程中Oct4启动子区域甲基化变化的实验研究

摘要

目的 探讨大鼠骨髓间质干细胞横向分化为肝细胞的过程中,八聚体转录因子4(Oct4)启动子甲基化的调控机制.方法 体外诱导大鼠骨髓源性肝干细胞(RBMLSC)向肝细胞横向分化,于不同时间点(0 d、7 d、14 d)提取细胞的DNA及RNA.用荧光定量PCR法检测白蛋白(ALB)和Oct4的mRNA表达水平,再用焦磷酸测序法检测Oct4基因启动子中4个CpG位点的甲基化变化.结果 细胞分化过程中,与0 d组相比,7 d组和14 d组的ALB mRNA分别增加5.22倍(P<0.05)和14.7倍(P<0.001),而Oct4 mRNA分别下降0.23倍(P<0.01)和0.055倍(P<0.001);同时Oct4启动子的CpG1、CpG2、CpG3甲基化频率显著上升,7 d组均明显高于对照组和0 d组(P<0.01),14 d组又均明显高于对照组、0 d组及7 d组(P<0.01),但CpG 4甲基化无明显变化.结论 细胞诱导分化过程中,Oct4启动子高甲基化,导致其mRNA表达减少,从而RBMLSC多能性消失.