绿色木霉产壳聚糖酶的分离纯化及酶学性质

摘要

对绿色木霉所产的壳聚糖酶进行分离纯化,结果表明当壳聚糖酶经过20%和60%的硫酸铵分级沉淀、透析、超滤浓缩、苯乙烯系阴离子交换柱以及Sephdex G-75层析柱的分离纯化,发现该酶的纯化倍数达到29.13倍,回收率达到53.9%,经SDS-PAGE电泳鉴定该酶达到了电泳纯,其分子质量为51.235 ku,最适温度为50℃,最适pH值为5.2,具有较强的底物特异性,K+和Mn2+对酶有一定的激活作用,Mg2+、Fe3+、Ca2+和Pb2+的影响不明显,Zn2+、Cu2+和Hg2+对酶有较强的抑制作用.通过Lineweaver-Burk法求得动力学参数,该酶Km值为0.048 mg/mL,Vmax值为0.6 mg·L-1·min-1.据酶解产物薄层层析实验分析其水解产物,说明此酶主要以内切方式作用于壳聚糖,该酶既能水解GclN-GlcN糖苷键,也能水解GlcNAc-GlcN糖苷键.