microRNA-125b通过调控Nrf2/Keap1信号通路影响光感受器细胞氧化应激

摘要

目的 研究在H2O2诱导的光感受器细胞氧化应激模型中microRNA-125b(miR-125b)调控核因子E2相关因子2(Nrf2)/Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)信号通路的作用机制,探讨其在干性年龄相关性黄斑变性(AMD)发病过程中的作用.方法 利用H2O2(800μmol/L)构建小鼠视锥细胞系661W细胞氧化应激模型,用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-125b及Keap1/Nrf2/HO-1 mRNA的表达.分别转染miR-125b模拟物、模拟物对照、抑制物、抑制物对照至661W细胞中,调控细胞miR-125b的表达,48 h后用qPCR在661W细胞氧化应激模型中检测miR-125b及Keap1/Nrf2/HO-1 mRNA的表达.用Western blotting检测Keap1蛋白的表达.结果 与对照组相比,miR-125b的表达在661W细胞氧化应激模型中显著降低,Nrf2及其下游基因HO-1 mRNA表达显著升高,Keap1 mRNA表达明显降低;与转染miR-125b模拟物对照组相比,转染miR-125b模拟物组Nrf2、HO-1与miR-125b mRNA表达显著升高,Keap1表达在mRNA水平无明显变化,在蛋白水平显著降低;与转染miR-125b抑制物对照组相比,转染miR-125b抑制物组Nrf2、HO-1与miR-125b mRNA表达显著降低,Keap1 mRNA表达水平无明显变化,蛋白表达显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miR-125b可能通过调控Nrf2/Keap1信号通路影响光感受器细胞氧化应激反应,调控干性AMD的发生,因而可能成为干性AMD治疗的新靶点.