重组鼠骨形态发生蛋白7真核表达载体的构建及在心肌细胞中的表达

摘要

目的:构建重组鼠骨形态发生蛋白7(BMP-7)的真核表达载体,并观察其在原代培养乳鼠心肌细胞中的表达情况.方法:将RT-PCR法获得的重组鼠BMP-7 cDNA克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,在FuGENE 6.0介导下转染差速贴壁法体外培养的乳鼠心肌细胞,72 h后分别应用RT-PCR、免疫细胞化学法和Western blotting检测mRNA和蛋白水平的表达情况.结果:经过PCR及酶切鉴定证明获得了真核表达质粒pcDNA3.1-BMP-7;通过RT-PCR、免疫细胞化学法和Western blotting证明pcDNA3.1-BMP-7能有效转染心肌细胞并表达BMP-7蛋白.结论:应用pcDNA3.1载体系统可有效转染重组鼠BMP-7,为应用于抗缺血再灌注损伤的研究创造了条件.