p11融合蛋白表达、纯化及抗血清的制备

摘要

目的: 表达GST-p11和6xHis-p11融合蛋白并制备GST-p11特异性抗体.方法: 将人p11基因克隆入两种原核表达载体pGEX-4T-2和pQE30,分别在大肠杆菌BL21和M15中表达,用Glutathione Sepharose 4B和Ni-NTA agarose亲和柱分别纯化目的蛋白.利用纯化的GST-p11蛋白制备多克隆抗体.结果: 得到高表达量的融合蛋白,经亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST-p11和6xHis-p11蛋白.以GST-p11蛋白免疫新西兰兔得到p11多克隆抗体,Western blotting证实该抗体能够识别6xHis-p11蛋白,具有较高特异性. 结论: 利用原核表达人p11融合蛋白制备的p11多克隆抗体具有较好的特异性,为研究p11蛋白在蛋白转运和定位过程中的作用提供重要的技术和材料保障.