人白细胞介素12双亚基共表达真核载体的构建

摘要

目的:为满足基因治疗的需要构建人白细胞介素12(hIL-12)双亚基共表达质粒.方法:先从人胚肾组织的逆转录产物中用PCR方法扩增出它的两个亚基P40和P35的cDNA全长,分别克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+/-)中构建单亚基质粒--P(+)/P40和P(-)/P35,然后再将二者串联克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中得到P(+)/IL-12质粒.脂质体转染HepG2后24,48 h ELISA检测细胞培养上清内hIL-12蛋白质表达.结果:P(+)/IL-12质粒经酶切和测序证明两亚基连接方向正确,序列无突变;ELISA检测细胞上清结果证实可表达hIL-12蛋白质.结论:成功构建P40和P35双亚基真核共表达质粒--P(+)/IL-12,为模拟hIL-12生理表达方式,简化hIL-12基因治疗操作奠定了基础.