瞬时感受器电位通道vanilloid 4在机械牵张人脑微血管内皮细胞中对内皮型一氧化氮合酶的作用

摘要

目的:筛选人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cells,HBMEC)中瞬时感受器电位(transient receptor potential,TRP)通道亚型,检测该通道亚型在机械牵张刺激中对内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白表达的影响及探讨相关机制.方法:荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)、Western印迹及细胞免疫荧光筛选HBMEC上TRP通道亚型.根据筛选的TRP通道亚型将细胞分组,应用多功能小型生物撞击机给予机械牵张刺激;流式细胞仪检测细胞牵张前后胞内Ca2+荧光强度变化;Western印迹检测eNOS蛋白表达情况.结果:qRT-PCR结果表明:TRPV4及TRPC1的mRNA相对表达量较多;细胞免疫荧光及Western印迹显示TRPV4通道蛋白表达;流式细胞仪检测结果显示,特异性TRPV4通道抑制组较单纯牵张组Ca2+相对浓度低(P＜0.001),较未牵张组(P=0.072)、非特异性TRP通道抑制组(P=0.308)无明显差异.Western印迹检测结果显示:TRPV4通道抑制组和内皮型一氧化氮合酶抑制组eNOS蛋白表达水平较单纯牵张组明显降低(P＜0.05),较未牵张组无明显差异(p＞0.05).结论:TRPV4在HBMEC上有表达,机械牵张将其激活后,可以引起eNOS蛋白表达增多,其机制可能与胞外Ca2+的内流有关.