人线粒体DNA缺失肝癌细胞株建立

摘要

人线粒体DNA缺失肝癌细胞株(ρ0SK-Hep1)的建立及鉴定。采用溴化乙锭(EB)诱导,PCR、Southern杂交及选择性培养方法进行鉴定。ρ0SK-Hep1细胞在含EB、无尿嘧啶和丙酮酸的选择培养基中从第1天始细胞逐渐悬浮、肿胀,培养第5天以后大量悬浮死亡,且贴壁疏松,10～12天细胞完全悬浮死亡。在选择性培养基中可以正常生长增殖成单层,有少量悬浮。同期非选择培养的SK-Hep1细胞生长正常。PCR结果显示,细胞色素氧化酶I、II(COXI、COXII)及内参G3PDH在SK-Hep1细胞中均可扩增出相应的条带,ρ0SK-Hep1细胞只见内参条带的形成。Southern杂交结果显示,ρ0SK-Hep1细胞未见COXI、COXII杂交条带形成。经EB诱导后成功地获得了ρ0SK-Hep1细胞株。