原代小鼠心脏成纤维细胞的衰老模型建立

摘要

目的:构建原代小鼠心脏成纤维细胞的衰老模型。方法:取24h内出生的乳小鼠心脏组织,使用酶消化法分离获得心脏成纤维细胞,通过形态学和Vimentin免疫荧光染色法鉴定心脏成纤维细胞。分别使用阿霉素(DOX)(10 nmol/L)和重组转化生长因子-β1(TGF-β1)(5ng/mL)刺激心脏成纤维细胞48h后换正常培养基72h,采用EdU染色法检测细胞增殖情况,使用β-半乳糖苷酶衰老染色评估衰老细胞比例,使用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)的方法检测细胞中衰老标志分子P16和P21以及衰老分泌表型相关基因(Il1b,Il6,Ccl2)的mRNA表达变化。结果:分离提取的心脏成纤维细胞呈梭状或星形的扁平细胞,Vimentin蛋白免疫荧光染色呈阳性。与对照细胞相比,使用DOX和TGF-β1刺激后,成纤维细胞中EdU阳性细胞比例均显著减少,β-半乳糖苷酶阳性的衰老细胞比例均显著增加。qRT-PCR的结果显示诱导衰老的心脏成纤维细胞中衰老标志分子P16和P21的表达显著上调,同时衰老分泌表型相关基因Il1b,Il6,Ccl2的表达水平也显著增加。结论:使用具有心脏毒性的化疗药物DOX以及促纤维化性细胞因子TGF-β1均可成功建立心脏成纤维细胞的细胞衰老模型。