人脂联素真核表达质粒构建及其在LX-2中的表达

摘要

目的 构建人全长脂联素真核表达质粒,转染人肝星状细胞系(LX-2),观察其表达及分泌情况,为脂联素在肝纤维化作用的基础及临床研究提供实验数据.方法 提取人脂肪组织mRNA,用RT-PCR扩增出添加酶切位点的人全长脂联素基因片段,双酶切扩增出的目的 基因片段及空载体质粒P7,将酶切后的片段进行连接、转化构建质粒.用FuGENE HD将构建成功的质粒转染LX-2细胞,用免疫荧光观察其转染效率及细胞定位,Western blotting检测脂联素蛋白表达.结果 酶切及测序证实成功构建人全长脂联素真核表达质粒,免疫荧光检测转染效率约为40%,Western blotting检测到30 000处存在目的 蛋白表达,与预期相对分子质量一致.结论 成功构建的人全长脂联素真核表达质粒能有效转染LX-2细胞及表达脂联素蛋白.