miR-34a通过靶向CD 47激活PI3K/Akt途径抑制异丙酚诱导的幼鼠海马神经元细胞凋亡

摘要

目的 研究miR-34a对异丙酚诱导的神经元细胞凋亡的影响,miR-34a、CD 47的靶向关系及在此过程中PI3K/Akt途径的作用.方法 提取分离幼鼠海马神经元细胞,在不同浓度异丙酚(1、10、20、40、60、80μg·mL-1)处理12h,采用MTT法检测神经元细胞活力,流式细胞术法检测神经元细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测神经元细胞中miR-34a、CD 47 mRNA的表达水平;将Control组(未转染病毒)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-34a组(转染miR-34a mimics)、pcDNA 3.1组(转染pcDNA 3.1)、miR-34a+CD 47组(miR-34a mimics和pcDNA 3.1-CD 47共转染)以慢病毒法转染至幼鼠海马神经元细胞中,并用一定浓度异丙酚处理.采用MTT法检测各组细胞活力,流式细胞术法检测各组细胞凋亡情况,RT-qPCR检测各组miR-34a、CD 47 mRNA的表达水平,Western blot检测各组CD47、PI3K、Akt、p-Akt、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3蛋白的表达水平,双荧光素酶活性实验验证miR-34a对CD 47的靶向作用.结果 幼鼠海马神经元细胞活力及凋亡率与异丙酚浓度均成剂量依赖性,且浓度≥20 μg·mL-1的异丙酚作用下,随浓度的升高,细胞活力显著降低(P＜0.01),细胞凋亡率显著升高(P＜0.01),在异丙酚作用后miR-34a表达量显著降低,CD 47 mRNA表达量显著升高;转染后各组细胞与Control组相比,miR-34a组细胞活性显著升高(P＜0.01),CD 47蛋白表达量显著降低(P＜0.01),PI3K、p-Akt、Bcl-2表达均显著升高(P＜0.01),Bax、Cleaved caspase-3表达均显著降低(P＜0.01);CD 47为miR-34a靶基因.过表达CD 47会减弱miR-34a抑制异丙酚诱导的神经元细胞凋亡作用.结论 miR-34a可通过靶向负调控CD 47并有效抑制异丙酚诱导的神经元细胞凋亡,其可能的作用机制为激活PI3K/Akt通路.