高浓度腺苷对脑缺血再灌注线粒体编码基因表达影响途径

摘要

目的:根据高浓度外源ATP对脑缺血再灌注线粒体编码基因表达具有影响这一研究结果,应用可能作用途径的拮抗剂对其作用途径进行研究.方法:采用颈动脉分流法制备大鼠脑缺血再灌注模型,将缺血时间设置为5分钟,再灌注时间为2小时.采用Fernandez-Silva的细胞器体外3H-UTP掺人法建立标准脑线粒体体外RNA转录体系(腺苷1mmol/L).体系分为标准体系腺苷浓度1mmol/L,腺苷2mmol/L,腺苷2mmol/L+腺苷受体拮抗剂CGSl5943,腺苷2mmol/L+腺苷脱氨酶抑制剂Deoxyoformymine.用PCR仪对RNA转录体系产物进行PCR扩增及定性、定量分析.结果:在腺苷浓度2mmol/L的情况下线粒体编码基因-CoxlmRNA的相对表达量与腺苷浓度1mmol/L时的相对表达量相比有明显下降(P＜0.05).在实验腺苷浓度2mmol/L+Deoxyoformymin 1umol/L的情况下线粒体编码基因-Coxl mRNA的相对表达量与腺苷浓度2mmol/L再灌注相对表达量两者相比有明显差别,前者高于后者(P＞0.05).在腺苷浓度2mmol/L+CGSl5943 1umol/L时再灌Coxl mRNA的相对表达量与腺苷浓度2mmol/L的相对表达量无明显差别(P＞0.05).在实验腺苷浓度2mmol/L的情况下线粒体再灌注编码基因-CoxⅡmRNA的相对表达量与腺苷浓度1mmol/L时的相对表达量相比有降低(P＞0.05).实验腺苷浓度2mmol/L+Deoxyoformymin lumol/L的情况下线粒体编码基因-CoxⅡmRNA的相对表达量与腺苷浓度2mmol/L的相对表达量两者相比有明显差别,前者高于后者(P＞0.05).在腺苷浓度2mmol/L+CGS15943 1umol/L时,Cox-ⅡmRNA的相对表达量与实验腺苷浓度2mmol/L的情况下CoxⅡmRNA的相对表达量无明显差别(P＞0.05).线粒体编码基因-CoxⅢmRNA缺血再灌注后腺苷浓度1mmol/L时相对表达量为1.05.腺苷浓度2mmol/L时相对表达量为1.00.腺苷浓度2mmol/L+Deoxyoformymin 1umol/L时相对表达量为1.04.腺苷浓度2mmol/L+CGSl5943 1umol/L时相对表达量为1.03.四者比较无明显差别(P＞0.05).线粒体编码基因-ATPase6 mRNA在缺血再灌注腺苷浓度1mmol/L时相对表达量为0.42.腺苷浓度2mmol/L时ATPase6mRNA相对表达量为0.56.后者比前者有明显升高(P＜0.01).腺苷浓度2mmol/L+Deoxyoformyminlumol/L时ATPase6mRNA相对表达量与腺苷浓度1mmol/L时相对表达量相比亦有明显升高(P＜0.05).其与腺苷浓度2mmol/L时相对表达量相比也有提高(P＜0.05).腺苷浓度2mmol/L+CGS15943 1umol/L时与腺苷浓度2mmol/L时ATPase6mRNA相对表达量无明显差别(P＞0.05).线粒体编码基因-ATPase8mRNA在缺血再灌注腺苷浓度1mmol/L时相对表达量为0.76.腺苷浓度2mmol/L时相对表达量为0.74.腺苷浓度2mmol/L+Deoxyoformymin 1umol/L时相对表达量为0.77.腺苷浓度2mmol/L+CGS15943 1umol/L时为0.75,四者比较无明显差别(P＞0.05).结论:高浓度ATP对缺血再灌注脑线粒体编码基因的正常表达有负影响,这种影响会加重脑缺血再灌注损伤.ATP影响缺血再灌注脑线粒体编码基因的表达是通过腺苷胞内代谢产物途径而不是通过膜受体途径.