西花蓟马ISSR-PCR反应体系的建立与优化

摘要

[背景]西花蓟马是近年来在我国局部地区暴发成灾的重要入侵害虫.[方法]本文通过改进的STE法提取西花蓟马的基因组DNA,对西花蓟马ISSR-PCR反应体系中的DNA、引物、Taq聚合酶、buffer缓冲液、dNTPs、Mg2+和去离子甲酰胺等7个影响因素进行了单因素试验,初步筛选出各因素的较优浓度；然后对影响较大的4个因素进行了正交设计试验L16 (44),建立了适合西花蓟马ISSR分子标记的最佳反应体系.[结果]在20 μL的反应体系中包含模板DNA 30 ng、10 × Buffer2.0 μL、引物1.05μmol·L-1、Taq聚合酶2.0 U、dNTPs 212.5 μmol·L-1及MgSO4 2.25 mmol· L-1.[结论与意义]利用采自云南昆明、玉溪、楚雄、红河、保山、昭通、丽江、大理和普洱9个地方的西花蓟马样本对所建立的反应体系进行检验,结果表明优化后的体系适用于西花蓟马的遗传多样性分析,本研究可为进一步研究西花蓟马的种群结构奠定基础.