过表达Periostin蛋白对内皮前体细胞功能影响的实验研究

摘要

目的:构建Periostin蛋白过表达慢病毒载体,并检测其对内皮前体细胞(EPCs)功能的影响.方法:从小鼠骨髓中获取EPCs,并进行鉴定.采用Oligos设计获得目的基因,构建慢病毒载体LV5/Periostin.慢病毒感染EPCs,荧光显微镜下观察被感染细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况,Western blotting检测Periostin蛋白表达情况.CCK-8法和流式细胞计数检测被感染细胞的增殖和凋亡情况,划痕法和Transwell小室法检测被感染细胞迁移和侵袭能力的改变情况.结果:被重组慢病毒感染的EPCs明显表达GFP;过表达慢病毒组细胞增殖活性较阴性对照组低,而凋亡细胞较阴性对照组多(P<0.05);过表达慢病毒组细胞的迁移率较空白对照组细胞高,侵袭细胞数目较多(P<0.05).结论:可以从小鼠骨髓中成功分离和培养EPCs,过表达Periostin蛋白会降低EPCs体外增殖的活性,促进其凋亡;但会增加EPCs的体外迁移和侵袭能力.