重组腺病毒载体介导外源基因转移至脑血管的实验研究

摘要

目的基因载体直接体内转移血管壁为血管病的治疗提供一种新方法,本研究探讨腺病毒载体介导外源基因转移至颅内血管的可行性.方法250μl含巨细胞病毒启动子的编码报告基因-绿色荧光蛋白(GFP)基因的复制缺陷型重组腺病毒载体(Ad5CMV5GFP),滴度为2.5×109pfu/ml,经枕大池穿刺法注入正常兔的脑池内.注入腺病毒载体后1～7d,采用荧光显微镜、免疫组织化学和逆转录聚合酶链式反应方法从形态学和分子生物学方面检测颅内血管和血管周围组织中外源基因GFP的表达情况.结果直接体内转染后1d,在颅内大血管如基底动脉的外膜可见外源基因的表达,3d时减弱,7d后消失,而血管中膜和内膜未见外源基因的表达;注入腺病毒载体后1～7d,外源基因可以有效转移至颅底软脑膜细胞,小血管外膜和平滑肌层也可见外源基因的表达;注入腺病毒载体后兔体温未见升高,但是脑脊液中的白细胞数明显升高,血管壁中可见炎性细胞浸润.结论经脑池内注入重组腺病毒载体可以将外源基因转移至正常兔颅内血管和软脑膜中,但是如何减轻腺病毒载体引起的炎症反应需进一步研究.