ETR1靶向RNA干扰重组体的构建及序列分析

摘要

[目的]构建拟南芥乙烯受体(ETR1)特异性短发夹环RNA(shRNA)真核表达栽体.[方法]从ETR1基因cDNA序列上选取目标序列,设计2对引物,经PCR扩增得到正反向2个DNA片段(S51和AI),构建含有该正反向互补重复序列DNA片段的中间栽体,测序分析正确后再克隆到植物表达载体pCAMBIA1301中的Gus位置并经双酶切证实.[结果]ETR1基因S51和AI片段被成功克隆进质粒pCAMBIA1301中,酶切鉴定及测序分析显示,重组质粒shRNA编码序列与设计片段的序列完全一致.[结论]ETR1靶向RNA干扰重组体的成功构建,为进一步获得拟南芥乙烯受体基因的功能缺失突变体奠定良好基础.