棉铃虫蛋白酶体β5基因Habeta5的克隆与序列分析

摘要

[目的]运用分子生物学技术克隆棉铃虫蛋白酶体β5亚基新基因,为进一步研究其功能奠定基础.[方法]以棉铃虫中肠总RNA为模板,利用快速扩增cDNA末端(RACE)技术克隆棉铃虫蛋白酶体β5亚基新基因的cDNA序列并对所获序列进行分析.[结果]成功克隆了棉铃虫蛋白酶体β5亚基全长947 bp的cDNA序列,命名为Habeta5,包含1个843 bp的完整开放读码框(ORF)序列,编码蛋白质为280个氨基酸残基,预测分子量为30.87 kD,等电点为6.53.Habeta5蛋白在74～261氨基酸残基位置为蛋白酶体β5亚基的保守区域.Clustal W进行多序列比对发现,Habeta5蛋白质与果蝇等昆虫蛋白酶体β5具有62%以上的同源性,蛋白酶体β5的保守区域高度一致.邻近法NJ分子进化分析也显示,Habeta5蛋白质与其他生物蛋白酶体β5进化上同源.[结论]序列分析比对的结果表明所克隆的基因为棉铃虫蛋白酶体β5 亚基基因(GenBank登陆号:FJ358434).