石斛兰叶片原生质体分离条件研究

摘要

[目的]探讨了石斛兰原生质体分离过程中的影响因素,建立最佳的原生质体制备体系.[方法]以石斛兰叶片为材料,采用正交设计研究纤维素酶浓度、酶解时间、温度、pH值以及甘露醇浓度对石斛兰原生质体分离的影响.[结果]以3%纤维素酶R-10+0.6%果胶酶Y-23为混合酶液,0.5 mol/L甘露醇为渗透压稳定剂,在26 ℃的黑暗条件下,pH值为5.4的酶液组合中,黑暗条件下振荡,酶解15 h,获得的原生质体产量最高.[结论]该制备体系为后续原生质体培养和体细胞杂交奠定良好的基础.