沙门氏菌效应蛋白SopB 288～309肽段介导SopB依赖的HeLa细胞AKT的磷酸化研究

摘要

[目的]研究沙门氏菌效应蛋白SopB中跨膜疏水结构域288-309肽段对受SopB诱导的HeLa细胞Akt磷酸化激活中的功能.[方法]通过重叠延伸PCR的方法构建SopB第288 ～ 309位肽段缺失突变基因,并将该基因在HeLa细胞中进行异位表达,与野生型SopB基因进行比较,确定缺失的第288 ～ 309位间肽段在受SopB诱导的Akt磷酸化激活中的作用.[结果]与空载体对照相比较,在HeLa细胞中表达野生型SopB重组质粒明显激活了pAkt473的磷酸化,而在HeLa细胞中表达SopB缺失突变体SopB△28s-309时,则检测不到pAkt473的磷酸化激活.[结论]SopB表达激活HeLa细胞pAkt473的磷酸化与其第288～309位肽段的功能直接相关,该跨膜疏水结构域的缺失导致SopB蛋白不能亚细胞定位至细胞膜,从而导致SopB△288-309对pAkt473磷酸化激活功能的丧失.