海带属配子体DNA提取及ISSR-PCR体系优化

摘要

为了建立一个重现性好、稳定性高,适用于海带属ISSR遗传分析的PCR反应体系,从海带属配子体材料中提取基因组DNA作为模板,应用正交设计试验对反应体系中各因子的不同浓度进行组合优化.结果显示:适用于海带ISSR扩增反应的最佳体系(20 μL)为:1×PCR buffer,1.2 mmol/L Mg2+,0.2 mmol/L dNTPs,1.0 μmol/L ISSR引物,40 ng模板DNA,0.25 UTaq DNA聚合酶;扩增PCR程序为:95℃预变性3 min; 95℃变性45 s,52℃退火45 s,72℃延伸2min,共38个循环;最后72℃延伸10 min.在优化的海带ISSR反应条件下,扩增条带稳定,重现性好,为应用ISSR分子标记技术进行海带属遗传多样性研究和分子鉴定奠定了技术基础.