部分柿属植物IRAP反应体系的建立和指纹图谱构建

摘要

为建立柿属(Diospyros)植物反转录转座子间扩增多态性(IRAP)技术体系,对IRAP分析中影响PCR扩增结果的若干因子进行了研究.确立了适合柿属植物IRAP分析的技术体系:20 μL反应体系中,1×Buffer、模板DNA 50 ng、Mg2+2.0mmol/L、dNTPs 0.25 mmol/L、引物0.40 μmol/L、TaqDNA聚合酶1.0 U,矿物油20 μL;PCR扩增程序:95℃ 5min;95℃1 min,56℃ 1 min,升温速率+0.6 ℃/s,72℃ 2 min,循环44次;72℃延伸8 min.该优化体系在7种柿属植物33个基因型的IRAP分析中获得较理想的扩增结果,扩增片段120～1 500 bp,不同种和柿种以下不同品种间扩增条带总数和带谱相同.每个基因型都有其独特的指纹图谱,可作为区分不同基因型的依据,尤其芽变品种的鉴别.