人β防御素3和植物des-pGlu1-Brazzein融合蛋白的纯化、活性分析及其乳糖诱导表达条件优化

摘要

对表达乳糖诱导工程菌株BL-pET-hBD3-Brazzein(Bra)的人β防御素3(human β defensin, hBD3)和植物des-pGlu1-Brazzein融合蛋白进行了纯化和活性分析,并对工程菌株的乳糖诱导表达条件进行了优化.对目的蛋白的活性分析表明,hBD3-Bra融合蛋白有一定甜味,但是杀菌活性很弱,经凝血酶切割后,重组hBD3有明显抑菌活性,des-pGlu1-Brazzein的甜度大约为蔗糖的600倍.菌株生长和目的蛋白表达结果显示:0.5%～5.0%范围内高乳糖浓度会抑制菌株生长(P<0.01),但对目的蛋白表达无显著影响(P>0.05);诱导时间延长对菌株生长有利(P<0.01),对目的蛋白表达无显著影响(P>0.05);温度对菌株生长和目的蛋白表达均有显著影响(P<0.01).进一步研究表明,菌株最优生长温度是30～32℃,蛋白表达最优温度是30℃,乳糖和IPTG的诱导结果无显著差异(P>0.05).