利用高效转座质粒构建羽毛分解菌Streptinomonas maltophilia YHJ-1的突变体库

摘要

嗜麦芽窄食假单胞菌(Streptinomonas maltophilia)YHJ-1是一株能高效降解羽毛角蛋白的菌株;该菌对卡那霉素等多种抗生素不敏感.利用携带Tn5转座酶和卡那霉素抗性转座质粒pRL27和含氯霉素抗性基因盒的pMCm质粒,构建了以氯霉素抗性作为选择标记的转座质粒pRH30.以大肠杆菌(Escherichia coli) UQ3021/pRH30为供体,通过双亲本杂交,构建了S.maltophilia YHJ-1的插入突变体文库,该库共含1 246个转化子.随机挑选4个突变子经氯霉素抗性和PCR分析检测,结果显示突变体均有氯霉素抗性和氯霉素抗性基因,表明文库是可靠的.已从文库中筛选出 3株不能降解羽毛转化子,表明利用氯霉素抗性的转座质粒pRH30构建菌株YHJ-1的突变体是克隆其相关基因并进行遗传分析的有效方法.