手掌参中赤霉酸诱导的富含半胱氨酸蛋白基因的表达、纯化及鉴定

摘要

根据已筛选到的手掌参(Gymnadnia conopsea)中赤霉酸诱导的富含半胱氨酸蛋白部分cDNA序列,设计带有EcoR I和Hind Ⅲ酶切位点的引物.对编码区全长(gcgasa)及信号肽缺失的片段(△gcgasa)进行扩增,获得大小约319和238bp的片段.克隆到表达载体pET-32a,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3).经1 mmol/L IPTG诱导后,在分子量约26.0和25.2 kD出现融合蛋白条带.SDS-PAGE和细胞透射电镜结果表明:含有信号肽的外源基因在大肠杆菌中以包含体形式存在于周质空间,而信号肽缺失的片段主要以可溶形式表达,通过Ni(2+)-NTA亲和层析和凝胶过滤进一步纯化了目的蛋白.