小金海棠Fe3+-螯合还原酶MxFRO2基因启动子的克隆与表达分析

摘要

通过染色体步移法从小金海棠(Malus xiaojinensis)基因组中克隆了三价铁螯合还原酶(ferric chelate reductase,MxFRO2)基因翻译起始位点上游1 738 bp的启动子序列.生物信息学分析表明,该启动子片段中存在光响应元件G-box、生长素应答元件、铜元素响应元件、TATA-box、CAAT-box等顺式作用元件.从TAIR网站获得了拟南芥(Ambidopsis thaliana)中8个FRO基因上游的启动子序列,通过PlantCARE分析了其与MxFR02启动子的异同.根据在线预测结果,克隆了翻译起始位点上游1 644 bp(MxFul)和259bp(MxD1)两段序列,构建了其与GFP融合的瞬时表达载体,并将重组质粒通过PEG介导法分别转化拟南芥叶片原生质体,结果表明,小金海棠MxFul和MxD1两段启动子序列都能驱动GFP蛋白在拟南芥原生质体中的瞬时表达.