瑞戈非尼逆转肝癌细胞对索拉非尼耐受及作用机制

摘要

目的 探讨瑞戈非尼逆转肝癌细胞对索拉非尼耐受及作用机制.方法 培养人肝癌细胞株SMMC-7721,通过长时间渐进加量刺激的方法诱导构建对索拉非尼耐受的7721-SR细胞,用0、2、4μmol/L索拉非尼处理SMMC-7721和7721-SR细胞,检测细胞活力和细胞凋亡.Transwell和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot实验检测E钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白、磷酸化MET(P-MET)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(P-ERK)和磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)表达情况.用瑞戈非尼0.5μmol/L预处理7721-SR细胞6h,检测细胞活力、细胞凋亡、细胞侵袭及相关蛋白表达情况.结果 用0、2、4μmol/L索拉非尼培养SMMC-7721、7721-SR细胞,发现7721-SR细胞活力高于SMMC-7721细胞,7721-SR细胞凋亡少于SMMC-7721细胞(P＜0.05).与SMMC-7721细胞比较,7721-SR细胞侵袭和迁移能力增强,E-cadherin表达下降,波形蛋白、P-MET、P-ERK和P-Akt表达上调(P＜0.05).用MET抑制剂克唑替尼、ERK抑制剂U0126和Akt抑制剂MK-2206 2HCl处理7721-SR细胞,发现细胞活力降低(P＜0.05),E-cadherin表达上调,波形蛋白表达下调(P＜0.05).用瑞戈非尼预处理的7721-SR细胞活力降低,细胞凋亡增加,P-ERK、波形蛋白表达下调,E-cadherin表达上调(P＜0.05),细胞侵袭和迁移能力受到了抑制(P＜0.05).结论 对索拉菲尼耐受的肝癌细胞中MET/ERK和MET/Akt通路被激活,发生了上皮间质转化(EMT);瑞戈非尼能够通过抑制ERK通路和阻断EMT的发生,来逆转肝癌细胞对索拉菲尼耐受.