地高辛掺入RT-PCR半定量检测WT1基因在AML中的表达及其意义

摘要

目的建立客观的半定量检测WT1基因表达的方法,探讨WT1基因表达水平与急性髓细胞性白血病(AML)预后的关系.方法用地高辛标记的脱氧三磷酸尿苷(DIG-11-dUTP)掺入逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测,用KG-1细胞建立WT1表达的半定量稀释曲线,分析53例AML及21例非恶性疾患病人骨髓中WT1基因的表达.结果倍比稀释的KG-1细胞WT1基因表达水平与稀释倍数有良好的线性关系;将WT1基因与β-actin基因的表达水平之比＜0.16定为(-),≥0.16～＜0.6为(+),≥0.6～＜1.0为(),≥1.0为().21例非恶性疾患病人骨髓中WT1基因均为阴性,41例初治AML病人WT1基因表达阳性率为92.7%,随着WT1基因表达水平的升高,完全缓解(CR)率有明显下降的趋势(＜0.6及≥0.6组比较P＜0.025).CR后WT1基因表达水平明显下降,复发后又显著升高.结论 DIG掺入RT-PCR半定量检测WT1基因表达的方法客观、准确,WT1基因表达水平与AML的预后相关.