以乙肝病毒核心抗原HBcAg为载体的utrophin抗体的制备

摘要

目的 构建以乙肝病毒HBc为载体的带有utrophin的两个B细胞表位多肽的融合表达质粒pHBc-2UB,表达出融合蛋白并纯化,通过免疫新西兰大白兔获得抗utrophin的抗体.方法 通过DNA starⅡ模拟出utrophin的两个显著优势的B表位.用PCR法合成片段插入HBcAg序列的78位,将该合成片段克隆至pET28a载体中,构建重组表达质粒,表达出融合蛋白HBc-2UB,纯化后免疫新西兰白兔.再将该合成片段克隆至pGEX4-2载体中,构建重组表达质粒,表达出融合蛋白GST-2UB,用于检测两个表位的抗体.结果 测序结果表明重组质粒构建成功,SDS-PAGE电泳显示融合蛋白表达正确,ELISA检测到高滴度抗体.结论 以HBc呈现utrophin的B表位被成功表达和纯化,获得高滴度的与两个B表位结合的抗体,为utrophin检测和DMD治疗药物研究打下了基础.