鸡集落刺激因子基因克隆与序列分析

摘要

集落刺激因子(CSF)在机体免疫系统中发挥重要的免疫调节作用,根据GenBank上已发表的集落刺激因子cDNA基因序列自己设计一对特异性引物,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从刀豆蛋白A(ConA)诱导的鸡血液淋巴细胞总RNA中扩增出鸡集落刺激因子(Ch-CSF) cDNA, 用琼脂糖凝胶电泳回收试剂盒分离纯化cDNA片段,然后进行RT-PCR测序和序列分析.结果表明,克隆的鸡集落刺激因子(Ch-CSF)cDNA的开放阅读框为435 bp,编码144个氨基酸和大部分信号肽,与国外克隆的鸡的Ch-CSF基因序列比较,其核苷酸的同源性为29.4%,氨基酸的同源性为96.6%,同绵羊、人、牛、小鼠、犬和猪的GM-CSF序列比较,其核苷酸的同源性分别为29.7%、29.0%、34.3%、29.7%、29.4%和31.0%,氨基酸的同源性分别为9.7%、11.7%、11.7%、17.4%、9.0%和13.1%.以上结果表明,鸡集落刺激因子(Ch-CSF)基因被成功克隆,它存在着种属特异性.这为进一步研究该基因的生物学作用,特别是为利用CSF增强DNA疫苗的免疫能力的研究奠定基础.