骨质疏松骨组织差异表达基因消减cDNA文库的构建

摘要

目的构建抑制差减文库,为克隆、筛选骨质疏松骨组织中失活或低表达的致骨质疏松相关基因奠定基础.方法分别从小鼠正常骨和骨质疏松骨组织分离mRNA,合成双链cDNA,酶切后骨质疏松cDNA分成两组,分别与不同的接头连接.应用抑制性削减杂交(SSH)技术,分别以正常骨组织与骨质疏松小鼠cDNA作为检测子(tester)与驱赶子(driver),在通过两轮差减杂交和两次抑制性PCR得到两者之间的差异表达的cDNA,将所获得差减cDNA片段克隆入质粒表达载体(PointTM Xa-1 T-Vector),转化大肠杆菌JM109,挑取克隆进行PCR扩增鉴定插入片段.结果成功地构建了骨质疏松相关的的差减cDNA文库,获得的正、反向差减文库分别含576、322个重组子;插入片段的平均大小为5 30bp.结论该差减cDNA文库的建立为进一步筛选、鉴定骨质疏松发生过程中的相关调控基因奠定了基础.