H7N9流感病毒NA基因5'UTR可变区 A27G突变可增强NA基因转录与翻译

摘要

目的 探讨H7N9流感病毒神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因非翻译区(untranslated region,UTR)可变区碱基多态性对NA基因转录与翻译的影响.方法 通过生物信息学方法分析H7N9流感病毒NA基因UTR的可变区碱基多态性位点,人工合成N9-UTR可变区随机突变文库.利用自主构建的RNA聚合酶I eGFP报告系统,构建N9-3'UTR-eGFP-5'UTR RNA聚合酶I随机突变荧光报告文库.从N9-UTR突变荧光报告文库中随机挑选克隆转染H1N1流感病毒辅助感染的MDCK细胞,荧光显微镜观察eGFP的荧光表达,同时用多功能酶标仪定量检测eGFP的相对荧光强度;利用 β-actin作为内参,采用实时荧光RT-PCR定量检测eGFP基因的转录变化.测序鉴定eGFP上调或下调的N9-UTR克隆并分析导致eGFP表达变化的UTR可变区SNP特征.结果 随机筛选了6个N9-UTR可变区随机突变荧光报告克隆,发现N9-2克隆的eGFP下调,而N9-7克隆eGFP上调.测序分析发现突变核苷酸位点位于5'UTR的27位,eGFP上调表现为A27G.结论 H7N9流感病毒NA基因的5'UTR可变区A27G突变可增强NA基因转录与翻译.