成人肝细胞微粒体乙基吗啡N-脱甲基酶活性及酶动力学研究

摘要

目的 观察成人肝细胞微粒体乙基吗啡N-脱甲基酶(EDM)的活性水平、酶动力学特征及乙醇和头孢噻肟对酶动力学的影响.方法 肝组织除去筋膜和血红蛋白,加磷酸盐缓冲液4 ℃下匀浆,12 000×g离心15 min,取上清100 000×g超速离心60 min,沉淀加PBS/甘油缓冲液制成微粒体悬液,终点法测EDM酶活性.观察不同浓度乙醇和头孢噻肟对EDM酶活性及酶动力学参数最大反应速度Vm和米氏常数Km的影响.结果 48例成人肝细胞微粒体EDM活性为(0.89±0.18)U,女性组(0.96±0.22)U明显高于男性组(0.81±0.16)U (P＜0.05). 乙醇和头孢噻肟对EDM酶活性均有抑制作用,底物浓度为1.0 mmol/L时,抑制常数Ki分别为474 mg/L(1.04 mmol/L)和3.6%(0.62 mmol/L);头孢噻肟终浓度分别为0、200、400 mg/L时,米氏常数Km分别为0.80、0.86和0.96 mmol/L, Vm分别为1.46、1.39和1.35 mmol甲醛/g微粒体蛋白/min;乙醇终浓度分别为0%、2.0%、4.0%时,Km分别为0.80、0.94、和1.1 mmol/L,Vm分别为1.46、 1.36和1.22 mmol甲醛/g微粒体蛋白/min.结论 成人肝细胞微粒体EDM酶活性水平女性组高于男性组;乙醇和头孢噻肟对EDM酶活性的抑制作用是竞争性抑制为主的混合性抑制.