异育银鲫肝微粒体体外恩诺沙星 N-脱乙基酶酶促反应动力学初步研究

摘要

建立了异育银鲫肝微粒体体外孵育恩诺沙星(enrofloxacin, EF)的酶促反应体系,应用RP-HPLC法检测其主要代谢产物环丙沙星(ciprofloxacin, CF),以间接反映恩诺沙星N-脱乙基酶的活性.采用二氯甲烷提取、正已烷去脂提取有效成分,样品回收率均大于81.4%,含CF或EF的肝微粒体样品能在4 ℃下稳定至少72 h,日内变异系数不超过3.51%,日间变异系数不超过3.71%,EF和CF准确度分别小于8.1%、6.5%,检测限(信超比为3)分别为0.15 μmol/L、0.3 μmol/L.恩诺沙星在银鲫肝微粒体中代谢符合一级消除方程C=140e-0.072 t,消除速率常数(K)为0.072 /h,消除半衰期(T 1/2)为9.627 h.用Origin Lab软件的Hyperbl模型进行拟和,以方程y = P1·x/ (P2 + x)表示米氏常数V max、Km两者的关系,求得V max为0.260 2±0.014 7 nmol/mg·min,Km为53.898 5±10.225 7 μmol/L,内在清除率(C l int)约为0.004 8 mL/(min·mg).恩诺沙星消除率和环丙沙星转化率的研究结果提示,恩诺沙星在银鲫肝微粒体中的代谢以N-脱乙基反应为主,提示可能还通过其它途径生成另外代谢产物.而酶动力学研究数据(V max,C l int值)表明,恩诺沙星 N-脱乙基酶与底物结合力不强,酶促反应强度处于中等水平.据此,笔者推测恩诺沙星在银鲫肝微粒体中的代谢速度较为缓慢.