耻垢分枝杆菌DNA末端结合蛋白Ku的表达、纯化及酶学性质研究

摘要

目的 构建耻垢分枝杆菌末端结合蛋白Ku原核表达载体,并进行表达纯化及酶学测定.方法 以耻垢分枝杆菌str.MC2 155基因组DNA为模板,PCR法扩增ku基因,构建pQE-30-ku重组质粒,在表达宿主菌E.coli M15中诱导表达蛋白,Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,最后通过凝胶迁移电泳实验测定Ku蛋白与5'粘末端、3'粘末端和平末端3种不同末端DNA结合情况.结果 成功构建了ku原核表达载体pQE-30-ku,并能在宿主菌E.coli M15中表达,纯化后具有结合不同末端DNA的酶活性.结论 Ku基因克隆到原核宿主菌中能进行表达、纯化,纯化后的蛋白具有结合不同末端DNA的生物学活性,为分枝杆菌非同源末端连接的研究奠定了基础.