poly(A)加尾的实时荧光定量PCR检测血清miR-124a表达及临床初步应用

摘要

目的 建立ploy(A)聚合酶加尾的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法检测血清微小RNA(miR)-124a,并作临床初步应用.方法 用Trizol试剂提取血清总RNA.miR-124a ploy(A)聚合酶加尾逆转录获得cDNA,进行SYBR Green Ⅰ实时定量PCR扩增检测.制作C.elegans-miR-39模拟物浓度梯度稀释的标准曲线,定量血清中miR-124a的表达水平.结果 该方法能定量检测血清miR-124a表达水平,熔解曲线呈单峰,PCR扩增产物特异,在103～106 copies/uL范围内有良好的线性关系(r2 =0.999),并且检测重复性好.糖尿病患者血清中miR-124a表达水平明显高于健康体检者(P＜0.05).结论 所建立的ploy(A)聚合酶加尾SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法能敏感、特异地检测血清中miR-124a的表达水平,为下一步临床应用的研究奠定了方法学基础.